Congélation bactéries Utilisation Protocole Glycérine
Le protocole suivant fournit une alternative au Kit de congélation bactérienne des diagnostics OPS. Ce kit est un produit prêt à l'emploi qui comprend 162 flacons (avec des billes et de glycérol), deux supports cryogéniques et des étiquettes jet d'encre / laser qui sont résistantes aux solvants. Pour plus d'informations, consultez la page produit pour bactérienne Kit de congélation.
Les bactéries peuvent être congelés en utilisant une solution de 15% de glycérol. Le processus est simple et nécessite bouchon à vis microtubes et de glycérol stérile. Le glycérol est dilué à 30% pour qu'il soit facile à la pipette. Des quantités égales de glycérol 30% et le bouillon de culture sont mélangés, distribués dans des tubes puis congelé. Un kit est disponible (kit de congélation bactérienne) à travers OPS Diagnostics qui simplifie la préparation des tubes stériles pour ce processus.
Préparer une solution de glycerol à 30% (v / v) en mélangeant 30 ml de glycerol avec 70 ml d'eau. Transférer la solution dans une capsule à vis bouteille en verre et stériliser par autoclavage à 121 ° C pendant 15 min. Desserrer le bouchon pendant l'autoclavage.
Aliquoter 500 pl de glycerol stérile à 30% dans des tubes de microcentrifugation stériles de 2 ml contenant des billes de verre de 4 mm *.
Ajouter 500 pl de la culture bactérienne dans le tube et mélanger avec le glycérol en utilisant un mélangeur vortex.
Etiqueter le tube avec le nom de l'organisme, la souche, la date, etc.
Placer le tube dans le congélateur et enregistrer son emplacement.
Pour activer les bactéries, seulement quelques perles doivent être retirés du tube. Le tube n'a pas besoin d'être décongelé. Ouvrez le tube et desserrer quelques perles en utilisant une pointe de pipette stérile. Versez les perles en vrac sur une plaque de gélose et les rouler. Les colonies qui se développent devraient être repiquée. Remplacer le tube dans le congélateur immédiatement. Si la culture dégèle, ne recongeler pas que les cellules sont généralement très sensibles au gel et au dégel. Jeter de façon appropriée la culture décongelé.
* Nous préférons les tubes qui sont bouchon à vis et à bouchons avec joints toriques. Une option consiste à remplir le tube 1/3 de perles de verre de 4 mm (numéro de produit BAWG 4000-200-18) avant la stérilisation. Lors de la récupération des bactéries, enlever ou puce sur une perle sur une plaque de gélose et rouler pour disperser les bactéries. Cela permet d'éviter la décongélation du stock entier.