La purification de quantités micromolaires d'analogues de nucléotides en phase inverse à haute performance

Ouvre l'espace de travail de l'auteur a. Les chiffres et les lettres correspondent à la liste d'affiliation. Cliquez pour exposer ces derniers dans l'espace de travail de l'auteur b. Les chiffres et les lettres correspondent à la liste d'affiliation. Cliquez pour exposer ces derniers dans l'espace de travail de l'auteur d'un programme de biochimie / Biophysique, Institut de chimie biologique, Washington State University, Pullman, Washington 99164-4660 États-Unis b Département de chimie, Université de Washington, Pullman, Washington 99164-4660 États-Unis

La séparation des di- 5'-adénosine et triphosphates de pyrophosphate inorganique ou imidodiphosphate peut être réalisée par HPLC en phase inverse en utilisant un système de solvant tamponné par du bicarbonate de triéthylammonium (pH 6,7). Ce tampon a été utilisé parce qu'il a été neutre, facilement volatil à 20 ° C, et formé des paires d'ions avec des composés de phosphate pour permettre leur séparation par chromatographie en phase inverse. des quantités micromolaires d'analogues de nucléotides radioactifs ou fluorescents ont été purifiés en utilisant des colonnes C-18 ou une colonne de polystyrène divinylbenzène (PRP-1, Hamilton) avec le système de solvant décrit. Le procédé est particulièrement avantageux dans la préparation aux acides libres de sel, une base, ou des analogues de nucleotides thermiquement labiles. Il est possible avec cette méthode pour enlever 32 pi (173 pmoles) de l'ATP (50 umol, 30 mg) en une seule fois en utilisant une colonne C-18 analytique qui démontre que cette approche peut être utile pour les purifications semi-préparatives sélectionnés.