Comment faire la plaque de gélose parfaite à chaque fois - Bitesize Bio
Faire des plaques d'agar, si elles contiennent LB, ou tout autre M9 moyen, est une procédure simple. Mais il y a quelques subtilités qui tueront votre expérience, faire un gâchis ou tout simplement parce que vous incommoder si vous les avez tort. Donc, nous allons mettre au dossier exactement comment faire la plaque de gélose parfaite.
Suivez cela et vous obtiendrez de grandes assiettes - sans grumeaux, des bulles ou l'excès d'humidité - à chaque fois.
1. Compléter le milieu selon la recette, puis ajouter la quantité désirée d'agar (normalement d'environ 1% p / v) et on agite
Si vous autoclave, sans agitation, avec le argarose encore flottant au-dessus du liquide, vous obtenez un gâteau d'agarose dans le milieu. Intéressant, mais inutile
2. autoclaves pendant 25 minutes
Une fois que vous autoclavage pouvez bien sûr stocker le mélange moyen-agar dans une bouteille en verre trempé puis fondre dans un bain à micro-ondes ou dans l'eau en cas de besoin. Assurez-vous d'utiliser des bouteilles en verre trempé, ou ce (voir # 2) peut se produire
3. Laisser refroidir le mélange moyen-agar à 55 ° C. Pour obtenir des résultats cohérents régulièrement, faites le refroidissement pendant quelques heures dans un bain d'eau 55 ° C
Agar commence à se solidifier à environ 50 ° C. L'utilisation du bain d'eau signifie que vous pouvez toujours refroidir le mélange juste au-dessus de la température de solidification. Avant que j'utilisé un bain-marie, je me contentais refroidir dans l'air, mais ne manqueraient pas oublier et de revenir pour trouver la solidification avait déjà commencé - plaques grumeleux ne sont pas bons pour la diffusion!
4. Ajoutez les antibiotiques ou les suppléments
Vous pouvez être sûr que l'agar-agar est à une température appropriée parce que vous l'avez refroidi dans le bain d'eau
5. Verser les plaques. Utiliser environ 30 ml pour chaque plaque dans une plaque de 100 mm de diamètre
Moins mélange moyen-agar dans chaque plaque, plus facilement ils se dessèchent. 30 ml est une bonne quantité pour le stockage à long terme, 10-20 ml est très bien si vous allez utiliser les plaques relativement bientôt. Par souci de cohérence, je vous recommande d'utiliser une pipette sérologique. Aspirez 2-3 mLs plus que vous devez réduire au minimum de faire des bulles dans la plaque.
6. Laisser les plaques à définir. S'il y a des bulles dans les plaques, passer brièvement la flamme au-dessus pour les faire éclater.
erreur classique: en essayant de déplacer les plaques avant que l'ensemble est juste demander des ennuis. Il suffit de les laisser seuls!
7. Sécher les plaques dans la hotte à flux laminaire avec le couvercle légèrement pendant 30 minutes (ou dans un incubateur à 37 ° C pendant 2-3 heures, ou la température ambiante pendant 2-3 jours).
Le séchage de la plaque est très importante pour le stockage des plaques et des colonies de plus en plus sur eux. Si vous ne les sécher, l'humidité s'évapore et se condenser sur le couvercle pendant le stockage ou pendant l'incubation et vous donner des plaques humides horribles pour travailler avec. Au pire l'humidité peut affecter le revêtement de vos cellules. Utilisez une minuterie pour vous rappeler que les 30 minutes est comme - dans mon expérience - il est très facile d'oublier vos assiettes et de revenir pour trouver vos assiettes se sont transformées en chips / chips agar. Délicieux.
salut!
J'avais préparé des plaques d'agar semaine dernière et les a stockés sans inoculation. J'ai vérifié les plaques par jour pour assurer zéro contamination. il y a 2 jours, (à savoir environ 5 jours étaient plus) les plaques ne sont toujours pas contaminées. Mais quand j'ai vérifié aujourd'hui les plaques sont contaminées.
Que suggérez-vous?
Où avez-vous stocker les plaques? Comment avez-vous les stocker (par exemple enveloppés dans du papier ou dans un sac ou en vrac)? Je déteste poser tant de questions, mais les réponses nous aideront à me dépanner! # 128578;
Il y a quelques façons dont vous pouvez empiler vos assiettes pour les obtenir plus rapidement refroidir / sec, bien que vous avez besoin d'une bonne technique stérile pour éviter de compromettre votre agar. Par exemple. pour les plaques rondes, vous pouvez faire une « pyramide agar»:
Je verse beaucoup de plaques carrées, et vous pouvez faire pivoter les paupières d'environ quarante-cinq degrés de quitter l'agar exposé à l'air pendant que vous mettez la plaque suivante sur le dessus. Encore une fois, avec la mise en garde que votre technique doit être bon - ne pas coller vos doigts dans l'agar-agar, et ainsi de suite.
Je garde un petit lot de milieux stériles, liquide à pH ajusté dans la chambre froide, de sorte que si j'ai besoin des plaques dans un pincement, je peux simplement ajouter l'agar et l'autoclave. Il doit être changé assez régulièrement si!
J'espère que cela t'aides,
Peter
hey nick i essayé et ne fonctionnait pas. Combien de temps est nécessaire pour les bactéries de se développer dans les boîtes de Pétri avec de l'agar.
Je ne suis pas Nick, mais en général vous besoin d'environ 12 heures au minimum.
Un bon séchage est trop importante. Après que les plaques ont mis, je les retourner (ils sont généralement dans une pile de plaques 10-20) et les laisser sur le banc de laboratoire pendant la nuit (ou plus). Il en résulte un excès absorbant l'humidité de nouveau dans l'agar-agar, sans condensation sur le couvercle. NB Je verse la plupart des médias d'agar-agar de levure, qui a 2% d'agar.
Hey,
a l'expérience de tout le monde à ajouter des antibiotiques à une plaque déjà versé?
(Par exemple si vous êtes pressé)
Merci…
Des disques de papier imprégnés d'antibiotiques sont couramment utilisés pour les tests de sensibilité aux antimicrobiens. Les disques sont placés juste au-dessus de la gélose et de l'antibiotique circule alors dans la gélose entourant résultant dans des zones claires de l'inhibition.
De même, il est en effet possible de répartir les antibiotiques sur la surface des plaques d'agar avant bactéries ajoutant.
Je l'ai fait à l'occasion. J'ai normalement 1000x actions, ce qui voudrait dire que je devrais répandre 20 uL sur une plaque 20 ml, donc je vais habituellement diluer le stock 01h10 puis la plaque 200 antibiotiques uL, laisser sécher avant de se propager des cellules.
Une fois que je me suis habitué au volume correct d'agar requis dans chaque plaque, je verse maintenant mes assiettes dans une pile - qui est, je prends ma pile vide du couvercle inférieur, ce qui expose la dernière base, verser, remplacer la pile, saisir suivant couvercle en place, verser, remplacer la pile ... etc.
Cela fait verser beaucoup de plaques (centaines) à un moment très facile, comme les déplacer devient une simple question de glisser lentement la pile à l'arrière du banc pour faire place à plus de verser près de la Bunsen (à savoir dans le champ stérile). * Gardez à l'esprit les plaques empilées prennent plus de temps à définir. *
En outre, si vous boudez dans un flux laminaire, ils ont mis à sec et plus rapide, et vous ne pas besoin d'un Bunsen dans le flux.
J'espère que cela pourra aider.
Une bouteille d'agar refroidisseur est également beaucoup plus facile à tenir en versant sur des plaques, également agar très chaud se déforme les paupières de votre boîte de pétri.
Lorsque vous effectuez l'agar, faites seulement jusqu'à 3/4 du volume de la bouteille. Cela permet à l'espace de bulles hausse tout en faisant fondre la gélose au micro-ondes. Gain de temps et d'efforts d'avoir à nettoyer l'intérieur du micro-ondes.