Les courbes d'étalonnage, la partie I b ou non à b, LCGC
La plupart des méthodes LC sont utilisées pour l'analyse quantitative - à savoir les méthodes qui répondent à la « combien est là? » question. Presque toutes ces méthodes reposent sur la comparaison de la zone de pointe (ou moins souvent, la hauteur du pic) d'un échantillon avec celui d'un étalon de référence. Pour ce faire, nous utilisons une courbe d'étalonnage (également appelée courbe standard ou parfois « ligne »). Les deux méthodes les plus populaires de calibration sont la standardisation interne et externe. Dans la normalisation externe, la calibration est basé sur la comparaison de la réponse de l'étalon de référence avec sa concentration. Pour la normalisation interne, une concentration constante d'un étalon interne est ajouté à chaque échantillon et le rapport de la réponse de l'analyte à celui de l'étalon interne est comparée à la concentration. La méthode standard externe est plus simple et sera utilisé pour tous les exemples présentés ici; les détails de ces deux méthodes seront discutées dans un futur article.
Il y a plusieurs façons d'utiliser une courbe d'étalonnage pour quantifier les échantillons. Étant donné que la détection UV est utilisé pour la plupart des méthodes de LC, et la réponse du détecteur UV par rapport à l'aire du pic est linéaire sur au moins cinq ordres de grandeur, on peut supposer une réponse linéaire est possible lors de l'utilisation d'un étalonnage de la méthode qui couvre une large gamme de concentrations. D'autres méthodes de détection, par exemple, la spectrométrie de masse (MS) ou par évaporation de détection de diffusion de lumière (ELSD), ont des plages linéaires étroites, donc un étalonnage linéaire peut ne pas être approprié. Si un détecteur UV est utilisé, nous supposons que la courbe d'étalonnage bien comportés sera linéaire. La linéarité est définie comme
où Y est la réponse (région), x est la concentration, m est la pente de la courbe et b est la ordonnée à l'origine. (Même si la relation est linéaire, nous appelons encore une courbe.) Lorsque la courbe passe par l'origine (x = 0, y = 0), b = 0, et la courbe peut être exprimée comme
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