les stocks McClean Glycerol (levure)
Les souches de levure peuvent être maintenues presque indéfiniment à -80 ° C dans les stocks de glycérol. Vous devez vous assurer que dès que vous avez un vous congeler vers le bas comme un stock de glycérol souche confirmée (confirmation par PCR colonie, de séquençage, de vérification du type d'accouplement, etc.) dans la base de données principale de laboratoire.
- 30% de solution de glycerol stérile
- Cryotubes (Fisher # 12-565-163N; Nunc # 375418)
- Casquettes CryoTube, jaune (Fisher # 12-565-246; Nunc # 355077)
Instructions
Remarque: Vous allez geler jusqu'à deux flacons de culture, un pour les principaux -80 ° C les stocks et l'autre pour la sauvegarde -80 ° C les stocks.
- Ajouter la souche à la base de données de laboratoire McClean et lui attribuer un ID YMM. Si ceci est votre première fois d'entrer quelque chose dans la base de données, s'il vous plaît parler à Megan. Certains membres du laboratoire ne seront pas avoir accès à la base de données principale, dans ce cas, vous devriez demander à Megan pour créer l'entrée de la base de données pour vous.
- A partir d'une plaque, choisissez un COLONIE unique.
- Inoculer les cellules pendant la nuit dans YPD (ou des milieux sélectifs si elles contiennent des plasmides) et croître à 30 ° C, de sorte que le matin, vous avez une culture saturée.
- Mettre 900 ul du glycerol à 30% stérile dans deux tubes cryogéniques (900μl par chaque flacon).
- Ajouter 900 ul de la culture pendant la nuit saturée à chaque cryovial.
- Inverser les flacons à plusieurs reprises pour mélanger.
- Mettez un bouchon jaune sur chaque flacon. Étiquette haut de chaque cryovial avec juste le nombre YMM (par exemple « 100 ») et l'étiquette du côté de chaque tube avec le numéro YMM, la date, vos initiales et toute autre information utile.
- Ajouter un tube à la boîte de stock YMM approprié dans le -80 principal ° C et ajouter l'autre flacon à la boîte de stock de sauvegarde. Ne pas utiliser le -20 ° C congélateur, les stocks de glycérol ne maintiennent pas la viabilité supérieure à environ -55 ° C.
- Vérifier que les flacons sont étiquetés et bien entrés dans la base de données de laboratoire McClean!
S'il vous plaît signer votre nom à votre note en ajoutant « » '*
« » ': Au début de votre conseil.