Rattraper bouillons de Nuffield Foundation
La capacité de faire différents milieux de culture pour la culture de micro-organismes différents est une partie essentielle d'une enquête de microbiologie.
Agar fournit une matrice de support pour les éléments nutritifs dissous gelée. Différents nutriments sont appropriés pour la culture de micro-organismes différents.
Dispositif and Chemicals
Ajouter différents éléments nutritifs à l'agar-agar de base en fonction des organismes que vous envisagez à la culture.
Santé - Sécurité et notes techniques
Reportez-vous à CLEAPSS carte de recette 1 pour plus de détails de l'agar de manutention. Le danger identifié se rapporte à l'inhalation de la poudre lors de la gelée d'agar - la mesure de contrôle pèse la poudre dans une sorbonne. Le risque de brûlures lorsqu'il s'agit de liquide chaud est réduite en portant des gants.
2 gélose nutritive pour les bactéries Mélanger 2 g de Bovril, 0,5 g de chlorure de sodium et 1,5 g d'agar-agar avec 10 cm 3 d'eau en une pâte. Lentement ajouter de l'eau tout en agitant jusqu'à ce que le volume est de 100 cm 3. Chauffer dans un bain d'eau bouillante à 95 ° C dans le conteneur requis.
3 agar de malt pour les champignons Mix 2 g d'extrait de malt avec 2 g de gélose avec 10 cm 3 d'eau en une pâte. Lentement ajouter de l'eau sous agitation jusqu'à ce que le volume est de 100 cm 3. Chauffer dans un bain d'eau bouillante à 95 ° C dans le conteneur requis.
4 agar d'amidon Faire une pâte contenant 1 g d'amidon soluble dans 10 cm 3 d'eau chaude. Ajouter 1,5 g d'agar-agar, bien mélanger, et ajouter lentement davantage d'eau sous agitation jusqu'à ce que le volume est de 100 cm 3. Chauffer dans un bain d'eau bouillante à 95 ° C dans le conteneur requis.
6 gélose à l'extrait de levure Mannitol (de MYEA) Pour 1 litre de gélose à l'extrait de levure mannitol (MYEA) suspend 10 g de gélose dans 1 litre d'eau. Chauffer pour dissoudre. Ajouter 0,5 g K2 HPO4 (Hazcard 95C), 0,2 g MgSO4 0,7 H2 O (Hazcard 59B), 0,2 g de NaCl (Hazcard 47B), 0,2 g de CaCl2 .6H2 O (Hazcard 19A), 10 g de mannitol et 0,4 g d'extrait de levure . K2 HPO4. MgSO4 0,7 H2 O et NaCl sont décrits comme risque faible. CaCl2 .6H2 O est un irritant sous forme de poudre, mais pas dans le milieu final.
7 sels minéraux exempts d'azote agar pour 500 cm 3 d'abord dissoudre 0,05 g de FeCl3 .6H2 O dans 500 cm 3 d'eau distillée. Ajouter 2 g K2 HPO4. 0,25 g MgSO4 .7H2 O, et 10 g de glucose. Dissoudre et vérifier le pH, ajuster à 8,3 si nécessaire avec du NaOH 0,1 M (Se référer à CLEAPSS Hazcard 91: Irritant à cette concentration). Verser dans une bouteille contenant 1 g CaCO3 et 7,5 g d'agar. Autoclave à 121 ° C. Mélanger pour disperser le CaCO3 avant la coulée. Vous pouvez acheter sans azote prêt à l'emploi agar de sels minéraux. K2 HPO4 (Hazcard 95C), MgSO4 .7H2 O (Hazcard 59B), le glucose (Hazcard 40C) et CaCO3 (Hazcard 19B) sont tous répertoriés comme Faible risque. FeCl3 .6H2 O est nocif en tant que solide, mais pas à la faible concentration de la gélose finale.
section CLEAPSS Manuel de laboratoire 15.2.7 a plus d'informations sur la façon de gérer et préparer des plaques d'agar. Vous pouvez également acheter des supports préparés dans des bouteilles ou des plaques (voir Fournisseurs ci-dessous).
un Calculer la quantité nécessaire et préparer agar juste assez pour l'étude - environ 15 cm 3 pour la profondeur normale dans une boîte de Petri de 90 mm. Tout excédent gardera pendant 6-12 mois dans des bouteilles-bouchon à vis hermétiquement fermés si stérile.
b Peser la poudre milieu gélose contenant le gel et les éléments nutritifs choisis, ajouter de l'eau et stériliser le mélange pendant le temps et à la température, indiquée par le fabricant.
c gélose à la chaleur et de l'eau à 95 ° C pour dissoudre la gélose. Toujours utiliser un bain d'eau à ébullition agar, et ne jamais ajouter l'agar à l'eau bouillante.
d flacons de bouchon avec un bouchon bien ajusté de laine de coton non-absorbant. Couvrir avec du papier sulfurisé ou du papier d'aluminium avant la stérilisation par autoclavage.
e Après autoclavage, le transfert vers un bain d'eau pour équilibrer à 50 ° C. Empiler des plaques après la coulée pour minimiser la condensation à l'exception de la plaque supérieure (s).
f Chauffer les boîtes de Pétri avant de verser pour minimiser la condensation.
g Conserver les plaques coulées dans un sac en plastique scellé jusqu'à ce que nécessaire pour réduire la déshydratation des médias.
h Diviser la gélose dans chaque stériles bouteilles McCartney si vous souhaitez que les étudiants versent leurs propres assiettes (voir verser une plaque de gélose).
ressources pour les enseignants de microbiologie
Société de microbiologie générale - source de microbiologie pratique de base, un excellent manuel de techniques de laboratoire et de microbiologie pratique pour les écoles secondaires, une sélection de travaux pratiques éprouvées à l'aide de micro-organismes.