Stockage des échantillons bactériens pour optimale Viabilité, Thermo Fisher Scientific
introduction
La longueur de temps spécifique qu'une culture demeure viable dans une condition de stockage donné dépend de la souche bactérienne. La mort cellulaire au cours du stockage est inévitable, mais devrait être réduite au minimum, autant que possible, ce qui peut sacrifier la facilité d'utilisation. Les cultures bactériennes qui sont utilisés régulièrement (c.-à-jour / semaine) peuvent être stockés sur des plaques de gélose ou dans des cultures de couteau dans un réfrigérateur standard à 4 ° C. Si les cultures ne seront pas utilisées pendant plus de quelques semaines, cependant, plusieurs méthodes de stockage à long terme devraient être pris en considération pour la viabilité bactérienne maximale (tableau 1).
le stockage à court terme
Le stockage à long terme
Comme mentionné ci-dessus, la température à laquelle les bactéries congelées sont stockées affecte combien de temps ils peuvent être stockés tout en restant viable. La congélation et la décongélation des cellules à un taux approprié et le maintien des stocks congelés à l'aide de la température de stockage appropriée afin de minimiser les dommages causés par le processus de congélation. En outre, plus la densité cellulaire, plus la récupération est après décongélation des cellules. Pour la plupart des bactéries, une densité de 10 7 cellules / mL entraînera la récupération adéquate si toutes les conditions sont bien entretenus. 1-2
Cryoprotecteurs: Comme l'eau dans les cellules est convertie en glace, solutés accumulent dans l'eau libre résiduel. Cette augmentation localisée de la concentration en sel peut dénaturer biomolécules. 3 En outre, la formation de cristaux de glace peuvent endommager les membranes cellulaires. Les additifs qui sont mélangés avec la suspension bactérienne avant la congélation inférieure au point de congélation et protègent les cellules lors de la congélation afin de minimiser les effets néfastes de la concentration de soluté accrue et la formation de cristaux de glace. Les cryoprotecteurs les plus couramment utilisés sont le diméthylsulfoxyde (DMSO) et de glycérol, qui sont typiquement utilisés à 5-15% (v / v). Les additifs non-perméables utilisées comme cryopreservants, tels que les polysaccharides, les protéines et les dextranes, adsorber à la surface des micro-organismes et forment une couche visqueuse qui protège les membranes, ce qui rend ces agents particulièrement utiles pour la cryoconservation. D'autres additifs couramment utilisés comprennent le sérum sanguin, l'éthylène glycol, le méthanol, le lait écrémé, des extraits de levure et de soja tripticase. 4
Lyophilisation: Les bactéries peuvent être lyophilisées en mettant en suspension des cellules en phase logarithmique dans un milieu de lyophilisation, puis la lyophilisation de la suspension. Toutes les bactéries ne peuvent être lyophilisées avec succès. 6-8 Certaines souches pourraient ne pas survivre au processus ou mourir lyophilisé rapidement une fois. La meilleure façon de déterminer si une souche est susceptible de lyophilisation est d'évaluer de manière empirique la stabilité post-lyophilisation tout en maintenant une culture vivante comme une sauvegarde. Une fois lyophilisé, il est préférable de stocker les bactéries égale ou inférieure à 4 ° C.