Griffin Anticorps connexes Solutions - Recettes
- 30% Acrylamide: 300 g Acrylamide
- 0,8% bis-acrylamide: 8,0 g bis-acrylamide
Méthodes: Pour faire 500 ml de solution
I) Placer 300 ml ddH20 dans le bécher d'un barreau agitateur
II) Ajouter 150,0 g d'acrylamide à l'H20 tout en agitant
III) Ajouter 4,0 g bisacrylamide au H20 tout en agitant
IV) permettent à l'acrylamide - bisacrylamide pour dissoudre
V) amener le volume final à 500 ml
VI) filtrer le vide acrylamide / bisacrylamide solution
anticorps Reconstitution
Albumine de sérum bovin
BSA est une protéine de stabilisant utilisé dans des peptides et des solutions d'anticorps pour réduire l'agrégation de la protéine. BSA est utilisé en raison de sa stabilité, absence d'effet dans de nombreuses réactions biochimiques et son faible coût, car de grandes quantités de celui-ci peuvent être facilement purifiés à partir de sang bovin, un sous-produit de l'industrie du bétail.
Spécifications pour une utilisation avec des anticorps de recherche
- origine américaine ou USDA certifiés
- poudre de fraction V
- traité choc thermique
- Protease gratuit
- DNAse
- RNAse
- IgG libre
- acides gras libres
Numéro de Bloom est une indication de la résistance d'un gel formé à partir d'une solution de concentration connue. L'unité de Bloom est une mesure de la force (poids) nécessaire pour appuyer sur une surface donnée d'échantillon de gel à une distance de 4 mm; Plus le nombre Bloom, plus le gel.
Numéro de Bloom est proportionnelle à la masse moléculaire moyenne:
Bloom Nombre Poids moléculaire moyen
50-125 (Low Bloom) 20 000 - 25 000
175-225 (Medium Bloom) 40 000 - 50 000
225-325 (Haute Bloom) 50 000 - 100 000
La gélatine est un mélange hétérogène de protéines solubles dans l'eau ayant des poids moléculaires moyens élevés, présents dans le collagène. Les protéines sont extraites par la peau bouillante, les tendons, les ligaments, les os, etc. dans l'eau. Gélatine de type A est dérivé de la gélatine tissulaire et de type B-durci acide est dérivé d'durci chaux tissue.1 gélatine est utilisée en tant que stabilisant, épaississant et agent texturant dans les aliments; dans la fabrication de produits de substitution de caoutchouc, les adhésifs, les ciments, les encres lithographiques et d'impression, les composés de plastique, soie artificielle, plaques et films photographiques, des allumettes, et les filtres de lumière pour lampes à mercure; dans le textile; pour inhiber la cristallisation de la bactériologie et de préparer des cultures; hybridation PCR en biologie moléculaire; dans l'industrie pharmaceutique comme agent de mise en suspension, un agent d'encapsulation et liant de comprimé; et dans des applications vétérinaires en tant que succédané de plasma et d'une éponge hémostatique.
Le glycérol est un liquide incolore, inodore, visqueux. Le glycérol est un composant commun de solvants pour les réactifs enzymatiques stockés à des températures inférieures à zéro degré Celsius puisque la solution reste visqueux et capable de pipeter. Glycérol déplace l'eau en solution et minimise les mouvements conformationnels de protéines.
De l'azide de sodium
L'azoture de sodium est un composé chimique ionique de formule NaN3. Ce sel azoture incolore est ajouté pour éviter la contamination bactérienne; azoture de sodium agit comme un bactériostatique en inhibant la cytochrome oxydase dans les bactéries gram-négatives. Inactivent HRP.
thimérosal
- 0,2 ug / ul dans du PBS 1X, 0,2% de gélatine, 0,1% d'azoture de sodium; Magasin à 4 ° C
Type de gélatine de veau B, 100 Bloom
Concentré ChIP - qualité EMSA
Aussi connu sous forme « transcruz » ou « X »
- 2,0 ug / ul dans du PBS 1X, 0,1% d'azoture de sodium; Magasin à 4 ° C ou -20 ° C (aliquote si congelé)
In vitro / année d'étude biologique
- 2,0 ug / ul dans du PBS filtre stérilisé 1X
solutions d'anticorps conjugués
peroxydase raifort
Le thimérosal est nécessaire parce que l'azoture de sodium est un inhibiteur irréversible de la HRP. Le thimérosal contient du mercure 49,6%. Le mercure est strictement interdit d'entrer dans les eaux usées. Bien qu'une solution unique a une faible concentration, le mercure est bioaccumulé par les algues et les bactéries dans les tuyaux de drainage. Il est cette bioaccumulation et l'élimination continue du mercure dans les drains qui peuvent contribuer à des violations potetntially d'élimination.
Phosphatase alcaline
Flurochromes
- (Protéine A / G / L et des conjugués d'agarose CNBr) 1X PBS, 0,02% d'azoture de sodium
Solutions de contrôle
IgG contrôle
Sera contrôle
Un tampon de blocage (sérum albumine bovine)
- 20 mM de Tris: 2,42 g de Tris pH 7,4 de base w / HCl
- 150 mM NaCl: 8,76 g de NaCl
- 0,01% de Tween-20: 0,1 ml de Tween-20
- 3% de BSA: 30,0 g de BSA (fraction V)
- 0,02% de NaN3: 10,0 ml de 2% de NaN3
Tampon de blocage (lait)
- 20 mM de Tris: 2,42 g de Tris pH 7,4 de base w / HCl
- 150 mM NaCl: 8,76 g de NaCl
- 0,01% de Tween-20: 0,1 ml de Tween-20
- 5% Lait: 50,0 g lait écrémé en poudre
- 0,02% de NaN3: 10,0 ml de 2% de NaN3
carbonate tampon
Pour 1 litre de 50 mM pH 08.02 à 09.06
- Du carbonate de sodium (105,99 g / mol): 5,3 g
- pH doit commencer à un pH d'environ 8,2 +/- utiliser NaOH 5 M pour augmenter le pH de ce tampon à 9,6
- En option ajouter 0,02% NaN3
solution caséines
1. Ajoutez une quantité appropriée de caséine de qualité Hammersten au tampon dans un récipient en verre avec une barre de rotation magnétique. (Concentration recommandée est de 0,5%, la caséine soluble maximale est de 1%).
2. Placer le bécher sur un agitateur magnétique / plaque chauffante.
3. Bien mélanger le tout en chauffant jusqu'à ce que la solution devienne translucide. Éviter de faire mousser.
Caspase Tampon de substrat
Préparation Solution de culture cellulaire
- Assurez-vous que les milieux de culture contient un antibiotique (penn / streptocoque); cette seule empêchera la majorité des problèmes de contamination.
- Dissoudre petite molécule solutés soit dans 100% d'éthanol ou 100% de DMSO. Ces solvants ne sont pas propices à la croissance bactérienne ou fongique, et leur utilisation permettra d'éviter les contaminants de se multiplier dans une solution mère.
Filtration stérile
- Les petites molécules peuvent être stérilisées par filtration à travers un filtre de 0,22 um. Il y aura une perte du produit au filtre. filtrage stérile est la meilleure précaution qui peuvent être prises contre la contamination; Cependant la perte de matériel au filtre peut introduire une certaine variabilité dans l'expérience aussi bien.
Coomassie
- Dissoudre 2 g Coomassie Bleu (Serva Blau) dans l'eau 250ml
- Ajouter lentement 75ml d'acide acétique glacial
- Ajouter 500 ml d'éthanol
- qsp 1000 ml avec de l'eau
Les concentrations finales: 0,2% Coomassie Bleu 7,5% d'acide acétique à 50% d'éthanol
- methanol 20%: 800 ml
- l'acide acétique glacial à 5%: 200 ml
- H2O 75%: 3 L
Rapports de couplage (F: P)
- 3 à 8 de la biotine par molécule d'IgG (biotine MW: 244)
- 4 à 7 FITC par molécule d'IgG (MW FITC: 390)
- De 1 à 2 par molécule IgG HRP (HRP MW: 40000)
- 1 APC par molécule d'IgG (APC MW: 100 000)
Ajouter 0,1% à DEPC H20
Bien agiter et autoclaves
contrôle du véhicule DMSO
Le diméthylsulfoxyde (DMSO) est un liquide soluble dans l'eau claire qui peut dissoudre les deux composés polaires et non polaires.
La précipitation de l'inhibiteur de la solution de DMSO quand il est introduit à la pipette dans des milieux aqueux est une caractéristique de certains inhibiteurs solubles dans le DMSO. DMSO inhibiteurs solubles qui sont sujettes à des précipitations peuvent subir une dilution dans un milieu aqueux, mais les médias doivent contenir 0,1-0,5% de DMSO avant l'inhibiteur est ajouté, et ils doivent être mélangés très rapidement pour éviter la précipitation.
Idéal quantité maximale de DMSO par rapport aux médias est de 0,1% depuis le DMSO seul peut avoir des effets secondaires importants. Le% de DMSO qui est cytotoxique pour les cellules est généralement de 0,1% et plus. La concentration finale de DMSO idéalement ne devrait pas dépasser 0,5%.
séquences de marqueur épitopique
épitope FLAG
5' GAC TAC AAG GAC GAC GAT GAC AAG 3'
3' CTG ATG TTC CTG CTG CTA CTG TTC 5'
D Y K D D D D K